Etusivu > Uutiset > Sisältö

Mikä on PCR-laboratorion suunnittelu

Aug 03, 2020

PCR-laboratoriosuunnittelun ydin:


1, PCR-laboratorioasettelu

PCR-monistustestauslaboratorio on periaatteessa jaettu kolmeen erilliseen työskentelyalueeseen: reagenssien varastointi- ja valmistusalue, näytteen valmistusalue, amplifikaatio- ja amplifikaatiotuotteiden analyysialue. Ristikontaminaation välttämiseksi jokaiselle työalueelle saapumisen on noudatettava tiukasti yhtä suuntaa, toisin sanoen vain reagenssin säilytys- ja valmistusalueelta → näytteenvalmistusaluetta → vahvistus- ja amplifikaatiotuotteiden analyysialuetta. Reagenssien ja näytteiden siirto kunkin koealueen välillä tulisi suorittaa siirtoikkunan läpi.



2. Laboratorion ilmastointi- ja ilmanvaihtojärjestelmien suunnittelu ja paineen hallinta

PCR-laboratoriossa ei ole tiukkoja puhdistustason vaatimuksia, mutta ristikontaminaation mahdollisuuden välttämiseksi eri kokeellisten alueiden välillä on suositeltavaa ottaa käyttöön täysi toimitus ja täydellinen poistoilman organisointimuoto. Samanaikaisesti ilmanoton ja poistojen suhdetta on valvottava tiukasti kunkin koealueen painevaatimusten varmistamiseksi.


微信图片_20200701162204

(1) Reagenssien varastointi- ja valmistusalue

Tärkeimmät toimenpiteet tällä koealueella ovat varastointireagenssien valmistus, reagenssien annostelu ja pääreaktioseoksen valmistaminen. Näytteiden valmistukseen käytetyt reagenssit ja materiaalit olisi kuljetettava suoraan tälle alueelle, ei muiden alueiden läpi. Reagenssiraaka-aineet on varastoitava tällä vyöhykkeellä ja valmistettava tarvittaviin varastointireagensseihin tässä vyöhykkeessä. Ilmavirran paineen hallitsemiseksi tämän alueen tulisi ylläpitää lievää positiivista painetta ulkopuolella.



(2) Näytteen valmistusalue

Tärkeimmät toimenpiteet tällä alueella ovat näytteiden säilyttäminen, nukleiinihappo (RNA, DNA) uuttaminen, varastointi ja lisääminen monistusreaktioputkeen sekä DNA-synteesin mittaus. Tämän alueen painegradientin on oltava positiivinen paine suhteessa viereiseen alueeseen, jotta vältetään aerosolien aiheuttama pilaantuminen pääsemästä alueelle viereisestä alueesta. Lisäksi koska aerosolien aiheuttamaa kontaminaatiota voi tapahtua näytteen lataamisen aikana, tarpeetonta kävelyä tällä alueella tulisi välttää.


(3) Vahvistus- ja monistustuoteanalyysialue

Tärkeimmät toimenpiteet tällä alueella ovat DNA-monistus ja monistettujen fragmenttien määrittäminen. Lisäksi tällä alueella voidaan suorittaa myös valmistetun DNA-templaatin (näytteenvalmistusalueelta) lisääminen ja pääreaktioseoksen valmistaminen (reagenssin varastointi- ja valmistusalueelta) reaktioseokseen. Painegradientin vaatimukset tällä alueella ovat: negatiivinen paine suhteessa viereiseen alueeseen, jotta vältetään aerosolin vuotaminen tältä alueelta. Aerosolien aiheuttaman pilaantumisen välttämiseksi tarpeeton kävely alueella tulee minimoida. Yksittäiset toimenpiteet, kuten näytteen lisääminen, tulisi suorittaa erittäin puhtaassa penkissä.


3. Saastumisen ehkäiseminen ja vähentäminen


PCR-laboratoriosuunnittelun ydinkysymys on, miten vältetään saastuminen. Varsinaisessa työssä seuraavat pilaantumistavat ovat yleisiä: monistuneiden tuotteiden saastuminen; luonnollisen genomisen DNA: n saastuminen; reagenssien saastuminen ja näytteiden välinen kontaminaatio. Koska pilaantumisen jälkeen kokeilu on lopetettava, kunnes pilaantumisen lähde on löydetty, ja kokeen tulos on mitätöitävä ja koe on toistettava. Siksi on aikaa vievää ja työlästä löytää pilaantumisen lähde laboratorion ympäristöstä pilaantumisen jälkeen sekä henkilöstö- ja materiaalivarojen tuhlaaminen. Siksi pilaantumisen välttämiseksi ensisijaisena tavoitteena tulisi olla ennaltaehkäisy, ei poistaminen.


(1) Tiukka työaluejako

Kunkin koealueen asetus on kohtuullinen; jokaisella koealueella tulisi olla selvät merkinnät (kuten silmiinpistävä talonumero tai erilainen pohjaväri jne.), jotta vältetään laitteiden ja reagenssien sekoittuminen eri koealueille.


(2) Järkevät järjestelmäasetukset

Kohtuulliset ilmastointi- ja ilmanvaihtojärjestelmän asetukset, yritä käyttää täydellistä toimitusta ja täydellisiä poistoilmastointijärjestelmiä; tiukka ilmavirran paineensäädin, jotta varmistetaan erilaiset painevaatimukset eri koealueilla.


(3) Normaali toiminta

Amplifikaatiotestauslaboratorion teknikkojen on suoritettava työharjoittelu, ja vasta pätevyytensä jälkeen he voivat harjoittaa kliinistä geenien monistustestit; kokeellisen toiminnan aikana käyttäjän on käytettävä käsineitä ja vaihdettava niitä usein. Lisäksi kertakäyttöisten korkkien käyttö toiminnassa on myös tehokas toimenpide pilaantumisen estämiseksi; siivous on oikea-aikaista ja oikeaa. Kokeellisen työn päätyttyä alue on puhdistettava välittömästi. Pinnan pyyhkimiseen ja desinfioimiseen käytettävän tavanomaisen desinfiointinesteen tai ultraviolettivalonsäteilydefinaation lisäksi joidenkin kokeellisten laitteiden tulisi olla myös autoklaavistoitavia.


(4) tiukka hallinnointi

Valvo tiukasti laboratorioon saapuvaa ja sieltä poistuvaa henkilöstöä. Henkilöstö, jolla ei ole mitään tekemistä kokeen kanssa, ei saa tulla laboratorioon omalla tahdollaan. Aseta mahdollisuuksien mukaan riippumattomat käytävät ja ovet koko koealueelle pääsemiseksi ja siitä poistumiseksi; minimoidaan tarpeeton kävely kävely koealueella ristikontaminaation mahdollisuuden vähentämiseksi; monistustuotteet Analyysialue on monistettujen tuotteiden pääasiallinen saastumisen lähde. Jätenestettä ei voida viedä laboratorioon. Se on liotettava ja desinfioitava desinfiointiaineessa ja heitettävä pois laboratoriosta. Kertakäyttöiset materiaalit, kuten käytetyt kärjet, tulisi myös desinfioida. Liotus ja desinfiointi, tasainen käsittely, kuten polttaminen jne .; monistustuoteanalyysialueella voidaan käyttää joitain geneettisiä mutaatioita ja myrkyllisiä aineita, ja erityistä huomiota tulisi kiinnittää koehenkilöstön turvallisuussuojaan.


(5) Täydelliset laboratorion tukitilat

Täydelliset laboratorion tukitilat ovat välttämättömiä kokeellisen työn varmistamiseksi. Vastaavat laitteet ja instrumentit olisi varustettava kunkin laboratorion erilaisen kokeellisen sisällön mukaan, kuten ultrapuhtaat penkit, sentrifugit, näytteenottajat jne.