Etusivu > Uutiset > Sisältö

PCR-puhdistuslaboratorion yleinen suunnittelu

Jul 22, 2020

Ristikontaminaation estämiseksi käytön aikana sen suunnittelua, rakentamista ja käytön hallintaa koskevat tärkeimmät vaatimukset ovat seuraavat:


1. Laboratorion suunnittelun ja rakentamisen, turvallisen työjärjestelmän tai turvallisuusstandardien käyttömenettelyjen on täytettävä nykyisen "Biosafety-laboratorion yleiset vaatimukset" GB19489 vaatimukset.


2. PCR on jaettu neljään toiminta-alueeseen työvaiheiden mukaisesti, nimittäin reagenssin varastointi- ja valmistusalueeseen, näytteen valmistusalueeseen, vahvistusalueeseen ja vahvistustuotteen analyysialueeseen. Jos reaaliaikainen fluoresoiva PCR-laite on varustettu, vahvistus- ja tuoteanalyysialueet voidaan yhdistää. Jokainen toiminta-alue on merkittävä selvästi, eikä eri toiminta-alueilla sijaitsevia laitteita ja esineitä saa sekoittaa.


PCR-laboratorion ilmavirran suunta voidaan suorittaa reagenssin varastointi- ja valmistusalueen →näytteen valmistusalueen→vahvistusalue→vahvistettu tuoteanalyysialue, jotta vahvistetut tuotteet eivät pääse esivahvistettuun alueeseen ilmavirran kanssa. Se voidaan suorittaa siten, että reagenssin varastointi- ja valmistusalueen ilmanpaine laskee → näytteen valmistusalue → vahvistusalue → vahvistustuotteen analyysialue. Se voidaan saavuttaa asentamalla pakokaasupuhaltimet, alipainepakotuslaitteet tai muut toteuttamiskelpoiset menetelmät.


3. Kuhunkin työalueeseen tulon tulee noudattaa tiukasti yhtä suuntaa eli reagenssin säilytys- ja valmistusaluetta → näytteen valmistusalue → vahvistusalue → vahvistustuotteen analyysialue. Eri työalueita (kuten eri värejä) tulee käyttää. Työntekijät eivät saa ottaa työvaatteita poistuessaan jokaisesta työalueesta.


4. Laboratorion puhdistus on suoritettava reagenssin varastointi- ja valmistusalueen suuntaan→näytteen valmistusalue→vahvistusalue→vahvistettu tuoteanalyysialue. Eri koealueilla olisi oltava omat puhdistuslaitteet ristikontaminaation estämiseksi.


5. Kun työ on ohi, työalue on puhdistettava välittömästi. Laboratoriopenkin pinnan työskentelyalueella pitäisi kestää kemikaalien, kuten natriumhypokloriittien, desinfiointi- ja puhdistusvaikutukset. Laboratoriopenkin pinnalla olevan ultraviolettisäteilyn on oltava kätevää ja tehokasta. Koska ultraviolettisäteilytyksen etäisyys ja energia ovat erittäin kriittisiä dekontaminaatiovaikutuksen kannalta, voidaan käyttää liikkuvaa ultraviolettilamppua (254nm aallonpituus) ja kun työ on valmis, sitä voidaan säätää säteilytettäväksi 60-90 cm:n sisällä kokeellisella pöydällä. Koska vahvistettu tuote on vain muutama sata tai kymmeniä peruspareja (bp), se ei ole herkkä UV-vaurioille, joten UV-säteilytetty vahvistettu fragmentti on säteilytettävä pidemmäksi aikaa, mieluiten yön yli.


4470e46a8191b41672af5226018ca72f



Reagenssin varastointi- ja valmistusalueen toiminnot ovat: varastointireagenssien valmistaminen, reagenssien annostelu ja vahvistusreaktioseoksen valmistaminen sekä kulutustarvikkeiden, kuten sentrifugiputkien ja kärkien, varastointi ja valmistaminen. Materiaalit, kuten varastointireagenssit ja näytteen valmistuksessa käytettävät kulutustarvikkeet, olisi kuljetettava suoraan reagenssin varastointi- ja valmistusalueelle, eivätkä ne voi kulkea vahvistusten havaitsemisalueen läpi. Pakkauksen positiivisia kontrollimateriaaleja ja laadunvalvontamateriaaleja ei saa varastoida tällä alueella, vaan ne on säilytettävä tällä alueella. Näytteen käsittelyalue.


Näytteen valmistusalueen tehtävänä on: nukleiinihappo (RNA, DNA) uutto, varastointi ja lisäys vahvistusreaktioputkeen. Kliinisiä näytteitä koskevien toimien osalta olisi täytettävä bioturvallisuuden toissijaisia laboratorioita koskevat suojavarusteita, henkilönsuojaimia ja toimintaspesifikaatioita koskevat vaatimukset. Koska aerosoleilla voi olla kontaminaatiota näytteen sekoittamisen ja nukleiinihapon puhdistuksen aikana, tälle alueelle voidaan vahvistaa positiiviset paineolosuhteet, jotta vältetään aerosolikontaminaatio lähialueilta. Näytteiden ristikontaminaation välttämiseksi on testattavan nukleiinihapon lisäämisen jälkeen peitettävä reaktioputke, joka sisältää reaktioseoksen. Mahdollisesti tarttuvien materiaalien kansi on avattava biologisessa turvakaapissa, ja näytteiden käsittelyä ja inaktivaatiota varten on oltava selkeät menettelyt.


Vahvistusalueen toiminta on: DNA-synteesi, DNA-vahvistus ja havaitseminen. Aerosolien aiheuttaman pilaantumisen välttämiseksi alueella käveleminen olisi minimoitava. On huomattava, että kaikkia testattuja reaktioputkia ei saa avata tällä alueella.


Vahvistetun tuoteanalyysialueen tehtävä on: lisäanalyysi ja tehostetun fragmentin, kuten hybridisaation, entsyymien ruoansulatuselektroforeesi, korkean suorituskyvyn nesteanalyysin denaturointi, sekvensointi jne. Nukleiinihapon vahvistustuotteilla on erilaisia analyysimenetelmiä, kuten kalvojen tai mikrolevyjen tai sirujen (radionuklidien merkitseminen tai ei-radioaktiivisten nuklidien merkitseminen), suora tai pilkottu agarose geelielektroforeesi, polyakryyliamidielekelifeliflektroforeesi, eteläinen siirto, nukleiinihapon sekvensointimenetelmät, massaspektrometria jne.


Vahvistustuotteen analyysialue on PCR-laboratorion tärkein vahvistustuotteen saastumisen lähde, joten on varottava kuljettamasta vahvistustuotetta ulos tämän alueen esineiden ja työvaatteiden kautta. Kun käytetään PCR-ELISA-menetelmää tehostetun tuotteen havaitsemiseksi, levyjen pesuun on käytettävä levyaluslevyä ja jäteneste on kerättävä 1-mol/L HCl:ään, eikä sitä voida kaataa laboratorioon, vaan se on hävitettävä pois PCR-laboratoriosta. Pudota. Käytetty kärki on myös liotettava 1 mol/L HCl:ssä ja sijoitettava jätesäkkiin hävitettäväksi menettelyjen, kuten polttamisen, mukaisesti. Koska tällä alueella voidaan käyttää tiettyjä geneettisiä mutaatioita ja myrkyllisiä aineita, kuten etidiumbromidia, akryyliamidia, formaldehydiä tai radionuklideja jne., kokejien turvallisuussuojaan olisi kiinnitettävä huomiota.